Akademisk afhandling
Laser-assisted microdissection of malignant tumours: a new and important method in cancer research
1. nov. 2005
2 min.
Denne ph.d.-afhandling udgår fra Patologisk Institut, Århus Sygehus, og består af fem originale arbejder og en oversigt.
Kræft er nu anerkendt som en genetisk sygdom med gradvis ophobning af genetiske defekter i de maligne celler. Undersøgelsen af disse forandringer er afhængig af sammensætningen af analysematerialet. Solide tumorer er heterogene, og genetiske analyser udført på hele biopsien vil øge risikoen for at tumorspecifikke forandringer maskeres af normalt DNA/RNA.
Laserassisteret mikrodissektion (LAM) har hurtigt vundet indpas til at indsamle homogent materiale. Vi brugte LAM sammen med PCR-baserede undersøgelser, og udviklede protokoller til udførelse af denne teknik på både frosset og arkiv-materiale, samt protokoller for IHC og ISH. PCR-baseret DNA-analyse viste ingen negativ effekt efter IHC og ISH, helt ned til enkeltcelleniveau. Derimod var der et signifikant fald i mængden af RNA. Endvidere har vi udviklet og brugt protokoller for enkeltcellemikrodissektion og I-PEP PCR, og vi har brugt real time -PCR til at undersøge forandringer i DNA og RNA. Selv i 300 celler kunne der analyseres forandringer i Her-2-gen-ekspression og -amplifikation, og vi fandt en statistisk signifikant forskel mellem grupper af patienter med og uden Her-2-gen-amplifikation. Resultaterne fra real-time- PCR stemte godt overens med resultaterne fra IHC (HercepTest) og FISH. Studiet viste bl.a. at mikrodissektion med efterfølgende DNA-analyse ved hjælp af LightCycler HER-2/neu Quantification Kit kan bruges som et alternativ til FISH, når man vil udvælge kandidater til Herceptin-behandling.
Resultaterne fra denne ph.d.-afhandling har vist mulighederne og understreget nødvendigheden af brugen af LAM, når man undersøger genetiske forandringer i solide tumorer.