Diagnosis of bacterial meningitis by real-time PCR - with focus on broad-range PCR

Ph.d.-afhandlingen er udført på Infektionsmedicinsk Afdeling, Skejby Sygehus, i tæt samarbejde med Klinisk Mikrobiologisk Afdeling, Skejby Sygehus. Arbejdet omfatter tre delstudier, hvori cerebrospinal væske (CSV)-prøver blev undersøgt for bakterielt DNA ved polymerase chain reaction (PCR) og sammenlignet med dyrkning og mikroskopi.

Bredspektret real-time -PCR er baseret på amplifikation af 16S ribosomalt RNA (rRNA)-genet, som kan påvise stort set alle bakterier, og efterfølgende DNA-sekventering identificerer bakterien.

Formålet var derfor at udvikle og validere en hurtig real-time-PCR-analyse baseret på 16S rRNA-genet alene eller i kombination med en speciesspecifik real-time -PCR anvendt på CSV'er. Bredspektret PCR blev anvendt på 209 CSV'er fra patienter med mistænkt samfundserhvervet bakteriel meningitis og 350 CSV'er fra patienter med hjerneventrikelvæskedrænage. En kombineret totimers PCR med samtidig påvisning af S. pneumoniae og N. meningitidis samt 16S rRNA-genet blev anvendt på 1.015 CSV'er.

I alle delstudier blev der påvist flere positive CSV-prøver ved supplerende PCR end ved den traditionelle mikroskopi og dyrkning alene. Bredspektret PCR vil derfor være et nyttigt supplement til dyrkning og mikroskopi ved diagnosticering af bakteriel meningitis - specielt i situationer, hvor der er givet antibiotika forud for lumbalpunktur eller ved negativ mikroskopi. Den kombinerede totimers PCR-strategi var mere sensitiv end den bredspektrede PCR alene.

Ved en implementering vil man i mange tilfælde få en hurtigere mikrobiologisk diagnose, og man vil i flere tilfælde få en endelig mikrobiologisk diagnose. Hermed vil sygeligheden af bakteriel meningitis kunne nedsættes, og overvågningen vil kunne forbedres.